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朝陽(yáng)市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀研發(fā)

在動(dòng)物疫病診斷標(biāo)準(zhǔn)等技術(shù)規(guī)范中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)試驗(yàn)中加底物的反應(yīng)步驟進(jìn)行規(guī)定，規(guī)定固定的時(shí)間，然后加終止液。但是，在許多酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中，加底物的反應(yīng)步驟需要根據(jù)陰性、陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)情況對(duì)反應(yīng)的時(shí)間進(jìn)行調(diào)整。如當(dāng)陰性與陽(yáng)性對(duì)照的反應(yīng)結(jié)果出現(xiàn)后，實(shí)驗(yàn)人員則可以加終止液。有關(guān)資料規(guī)定的時(shí)間可能太長(zhǎng)或者太短，這樣會(huì)對(duì)反應(yīng)的結(jié)果產(chǎn)生影響。如果加底物的反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)，樣品則有可能呈現(xiàn)陽(yáng)性，易導(dǎo)致誤診情況的產(chǎn)生。

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熱啟動(dòng)Taq酶的產(chǎn)生：在PCR的反應(yīng)過(guò)程中，主要有三個(gè)階段：變性、復(fù)性、延伸。Taq DNA聚合酶的復(fù)性溫度是72℃，但其在低溫下也有活性（活性較弱），也能催化引物與模板復(fù)性，只是錯(cuò)配率高，發(fā)生非特異性復(fù)性機(jī)率大。這樣在未達(dá)到72℃之前，反應(yīng)在Taq酶聚合下不斷擴(kuò)增出非特異性產(chǎn)物，而使實(shí)驗(yàn)失敗。在傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)中，這樣由低溫上升至高溫的過(guò)程中，引物錯(cuò)配和二聚體的形成機(jī)率非常高，Hot Start Taq DNA聚合酶就是讓PCR反應(yīng)一開(kāi)始就在大于70℃下進(jìn)行。當(dāng)溫度較低時(shí)，酶活性被封閉，當(dāng)溫度大于一定溫度時(shí)酶又開(kāi)始工作。這樣就避免了在低溫下復(fù)性、延伸的過(guò)程，消除引物錯(cuò)配和二聚體形成，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。我們是如何對(duì)Hotstart Taq酶修飾而讓它只在高溫下才能發(fā)揮活性？這就是Hot Start taq酶的作用原理。

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加強(qiáng)技術(shù)指導(dǎo)。中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中 心要制定國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫技術(shù)指南，組織開(kāi)展省級(jí)免疫技術(shù)師資培訓(xùn)。國(guó)家獸醫(yī)參考實(shí)驗(yàn)室、專業(yè)實(shí)驗(yàn)室、區(qū)域?qū)嶒?yàn)室和各省份動(dòng)物疫病預(yù)防控制中 心要持續(xù)跟蹤病原變化和流行趨勢(shì)，為各地免疫方案的制定、疫苗的選擇和更新提供技術(shù)支撐。各省份要組織做好鄉(xiāng)鎮(zhèn)動(dòng)物防疫機(jī)構(gòu)、村級(jí)防疫員及社會(huì)化服務(wù)組織的免疫技術(shù)培訓(xùn)。疫苗及診斷試劑供應(yīng)企業(yè)要做好培訓(xùn)、技術(shù)服務(wù)等工作。

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化驗(yàn)室診斷方法- -般采用的檢測(cè)依據(jù)為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，其次是有關(guān)動(dòng)物疫病檢測(cè)的其它技術(shù)規(guī)程、規(guī)范等，還可以采用化驗(yàn)室自行設(shè)定的檢測(cè)方法。應(yīng)結(jié)合化驗(yàn)室條件及樣品類(lèi)型等因素來(lái)選擇合適的方法。例如，化驗(yàn)室需診斷偽狂犬病，如果沒(méi)有基因擴(kuò)增儀，但有酶標(biāo)儀，就可以采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷，而不必用聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)診斷。使用化驗(yàn)室自行設(shè)定的檢驗(yàn)方法要慎重,因?yàn)椋辉摍z驗(yàn)方法是否正確有待驗(yàn)證;二如果將來(lái)有爭(zhēng)議.上訴法院，會(huì)有較大的麻煩。

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做好經(jīng)費(fèi)支持。按照《財(cái)政部、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于修訂印發(fā)農(nóng)業(yè)相關(guān)轉(zhuǎn)移支付資金管理辦法的通知》（財(cái)農(nóng)〔2020〕10號(hào)）要求，對(duì)國(guó)家確定的強(qiáng)制免疫病種，財(cái)政切塊下達(dá)補(bǔ)助資金，統(tǒng)籌支持各省份開(kāi)展強(qiáng)制免疫、免疫效果監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)、疫病監(jiān)測(cè)和凈化、人員防護(hù)，以及實(shí)施強(qiáng)制免疫計(jì)劃、購(gòu)買(mǎi)防疫服務(wù)等。開(kāi)展宣傳培訓(xùn)。各省份要充分利用各類(lèi)媒體，加大國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫政策的宣傳力度，提升養(yǎng)殖者自主免疫意識(shí)，提高科學(xué)養(yǎng)殖和防疫水平。要制定動(dòng)物免疫病種的免疫培訓(xùn)方案，定期開(kāi)展技術(shù)培訓(xùn)，指導(dǎo)相關(guān)人員科學(xué)開(kāi)展免疫，加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)。