滁州市實時熒光定量PCR儀標準
發(fā)布時間：2023-05-03 01:29:04
滁州市實時熒光定量PCR儀標準
全球，雖然只有少數(shù)的芯片可用于臨床診斷，但國內(nèi)基因芯片技術已經(jīng)處于世界領 跑的地位。基因芯片技術將是熒光定量PCR 檢測技術具挑戰(zhàn)的潛在對手，主要是：熒光定量PCR 技術一次只能檢測一個或幾個目標基因，而基因芯片技術可以實現(xiàn)對大量目標基因的同時檢測。隨著人類基因組計劃的進展，基因芯片在國內(nèi)外已成為研發(fā)熱點。若基因芯片技術迅速成熟并大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化，將對熒光定量PCR 檢測產(chǎn)生較大的沖擊。不過，基因芯片的大規(guī)模臨床應用還存在尚未克服的技術缺陷，主要是由于芯片診斷特異性和靈敏度低、芯片診斷成本高昂和芯片診斷配套儀器價格昂貴等原因，預計熒光定量PCR 檢測技術在今后5 到10 年內(nèi)可保持前鋒。
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熱啟動Taq酶產(chǎn)品優(yōu)勢;1. 靈敏度高：可直接擴增1個拷貝的支原體DNA。2. 化學修飾，無動物性DNA污染。3. 性價比高：相對市面上zui常用的熱啟動聚合酶性價比更高。4. 擴增效率高：熒光定量PCR起峰快，Ct值低，擴增效率高。5. 可重復性高：熒光定量PCR擴增曲線重合度高，受干擾影響少。熱啟動Taq酶應用：1. 熱啟動PCR 2. 熒光定量PCR 3. DNA序列測定4. TA cloning.
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動物檢疫的分類:根據(jù)我國現(xiàn)行的動物檢疫法律規(guī)定，我國動物檢疫分為進出境檢疫和國內(nèi).檢疫兩大類。①進出境動物檢疫。是指對進出我國國境的動物、動物產(chǎn)品，由口岸動植物檢疫機關實施的檢疫。具體分為:進境動物、動物產(chǎn)品檢疫;出境動物、動物產(chǎn)品檢疫;過境動物、動物產(chǎn)品檢疫;②國內(nèi)檢疫。指對國內(nèi)流動的動物、動物產(chǎn)品所進行的檢疫。具體劃分為:產(chǎn)地檢疫、屠宰檢疫、動物產(chǎn)品檢疫。
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在PCR反應早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產(chǎn)生進入指數(shù)期、線性期和終的平臺期，因此可以在PCR反應處于指數(shù)期的某一點 上來檢測PCR產(chǎn)物的量，并且由此來推斷模板初的含量。為了便于對所檢測樣本進行比較，在real-time Q-PCR反應的指數(shù)期，首先需設定一定熒光信號的域值，一般這個域值（threshold）是以PCR反應的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號 （baseline），熒光域值的缺省設置是3～15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍。如果檢測到熒光信號超過域值被認為是真 正的信號，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數(shù)（Ct）。Ct值的含義是：每個反應管內(nèi)的熒光信號達到設定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對數(shù)存在線性關系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線上計算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。