太原市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)
發(fā)布時(shí)間：2023-11-25 01:24:34
太原市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)
在PCR反應(yīng)早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產(chǎn)生進(jìn)入指數(shù)期、線性期和終的平臺(tái)期，因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點(diǎn) 上來(lái)檢測(cè)PCR產(chǎn)物的量，并且由此來(lái)推斷模板初的含量。為了便于對(duì)所檢測(cè)樣本進(jìn)行比較，在real-time Q-PCR反應(yīng)的指數(shù)期，首先需設(shè)定一定熒光信號(hào)的域值，一般這個(gè)域值（threshold）是以PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào) （baseline），熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。如果檢測(cè)到熒光信號(hào)超過(guò)域值被認(rèn)為是真 正的信號(hào)，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數(shù)（Ct）。Ct值的含義是：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。
太原市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)
分子診斷是指應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測(cè)患者體內(nèi)遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平的變化而做出診斷的技術(shù)。分子診斷是預(yù)測(cè)診斷的主要方法，既可以進(jìn)行個(gè)體遺傳病的診斷，也可以進(jìn)行產(chǎn)前診斷。分子診斷主要是指編碼與疾病相關(guān)的各種結(jié)構(gòu)蛋白、酶、抗原抗體、免疫活性分子基因的檢測(cè)。合理的標(biāo)本采集對(duì)保證標(biāo)本的完整性和核酸的定性/定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性是至關(guān)重要的。標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格按照適當(dāng)?shù)纳锇?全指南進(jìn)行采集，不合適的標(biāo)本處理會(huì)導(dǎo)致核酸降解，產(chǎn)生錯(cuò)誤的患者檢測(cè)結(jié)果。
太原市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)
在動(dòng)物疫病診斷中，化驗(yàn)室的操作較為關(guān)鍵，對(duì)診斷的結(jié)果有直接的影響。但是，在當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室操作中還存在一-些問(wèn)題，如檢測(cè)操作中、檢測(cè)報(bào)告中未填寫、不開具《檢測(cè)委托書》等這些問(wèn)題的存在嚴(yán)重影響動(dòng)物疫病的診斷，不利于動(dòng)物疫病的防控。因此，在今后工作中，需要對(duì)相關(guān)工作制度進(jìn)行不斷地完善，促使化驗(yàn)室的操作更加規(guī)范化、科學(xué)化;加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員的專業(yè)培訓(xùn)，提高其操作水平。只有這樣才能提高動(dòng)物疫病檢測(cè)的準(zhǔn)確性，為我國(guó)的動(dòng)物疫病防控工作做好鋪墊。
太原市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)
化驗(yàn)室診斷方法采用的檢測(cè)依據(jù)有以下幾種:①國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)以及農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn);②動(dòng)物疫病檢測(cè)的其他規(guī)范:③化驗(yàn)室自行設(shè)定的檢測(cè)方法。不管采用何種方法，都需要考慮化驗(yàn)室自身的條件及樣品類型，如在對(duì)偽狂犬病進(jìn)行診斷時(shí)，實(shí)驗(yàn)室有酶標(biāo)儀，沒(méi)有基因擴(kuò)增儀，在診斷時(shí)檢測(cè)人員可采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行診斷。如果送檢樣品為血清，檢測(cè)人員則可以采用酶聯(lián)吸附試驗(yàn)，而不需要采用動(dòng)物接種試驗(yàn)與病毒分離鑒定方法。