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朝陽(yáng)市分子診斷試劑原材料研發(fā)

動(dòng)物疫病診斷的主要內(nèi)容有:一是對(duì)血、 尿、糞等進(jìn)行臨床常規(guī)化驗(yàn);二是從流行病學(xué)角度，調(diào)查研究動(dòng)物疫病流行情況，主要調(diào)查動(dòng)物發(fā)病時(shí)間及地點(diǎn)、疫病蔓延情況、疫情來源及傳播的途徑與方式等;三是從病理學(xué)方面，剖檢因忠傳染病而死亡的畜禽尸體，查看其病理變化，或者取病料進(jìn)行送檢，再進(jìn)一步做病理組織學(xué)方面的診斷;四是從微生物學(xué)角度，檢查、堅(jiān)定從患病的畜禽病料當(dāng)中分離并且培養(yǎng)出來的病原微生物，或者是進(jìn)行動(dòng)物接種試驗(yàn)等，五是從免疫學(xué)角度，對(duì)組織或者細(xì)胞的變態(tài)反應(yīng)、細(xì)胞的免疫功能及血清學(xué)反應(yīng)等進(jìn)行診斷。

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Taq酶的酶動(dòng)力與擴(kuò)增效率有關(guān)。一般熱啟動(dòng)Taq酶的酶動(dòng)力越強(qiáng)，PCR擴(kuò)增的指數(shù)增長(zhǎng)期越長(zhǎng)，‘S型’曲線更加典型，熒光信號(hào)值更高，而且更適合做多重PCR檢測(cè)。我們?cè)容^過多家公司的熱啟動(dòng)Taq酶，在國(guó)外品牌中，英國(guó)Bioline公司的熱啟動(dòng)Taq酶，酶動(dòng)力較好，可做4重PCR，等量起始模板CT30時(shí)的熒光信號(hào)值高。在國(guó)內(nèi)品牌中，BIOG熱啟動(dòng)Taq酶的指數(shù)期較長(zhǎng)，可做3重PCR，且擴(kuò)增曲線的‘S’型不受影響，其它的國(guó)產(chǎn)品牌一般只能支持2重反應(yīng)，在做3重反應(yīng)時(shí)，擴(kuò)增曲線低矮，熒光信號(hào)值較低，無典型擴(kuò)增曲線，結(jié)果很難判定。

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相對(duì)分子質(zhì)量為94的Taq DNA聚合酶的活性較高，大約為200000 U/mg，在合成DNA時(shí)有一個(gè)較高的適溫度75～80℃。Taq DNA聚合酶雖然在90℃以上合成DNA的能力有限，但高溫時(shí)仍比較穩(wěn)定。有實(shí)驗(yàn)證明，在92.5℃、95℃和97.5℃時(shí)，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分別經(jīng)130 min、40 min和5～6 min后，仍可保持百分之50左右的活性，其半衰期較長(zhǎng)。所以，在一個(gè)PCR預(yù)備試驗(yàn)中，每次循環(huán)時(shí)上限溫度為95℃處理20S，則循環(huán)50次后Taq DNA聚合酶仍可保持百分之65的活性，能夠保證實(shí)驗(yàn)的需要。

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分子診斷儀器主要包括核酸提取儀、PCR 擴(kuò)增儀、核酸分子雜交儀、基因芯片儀和基因測(cè)序儀等。在技術(shù)相對(duì)容易攻破的中端儀器領(lǐng)域，如核酸提取儀、PCR 擴(kuò)增儀、核酸分子雜交儀、基因芯片儀國(guó)產(chǎn)化已經(jīng)成型，國(guó)產(chǎn)產(chǎn)品占據(jù)了主要市場(chǎng)，而 基因測(cè)序儀的國(guó)產(chǎn)化進(jìn)程正在發(fā)起突圍，主要表現(xiàn)為三種方式： （1）并購(gòu)國(guó)外的測(cè)序儀公司，在其核心技術(shù)的基礎(chǔ)上推出自主品牌的測(cè)序儀，以華大基因?yàn)榇怼＃?）利用內(nèi)生科研能力自主研發(fā)，以華因康基因、紫鑫藥業(yè)等公司為代表。（3）與國(guó)外知名測(cè)序儀生產(chǎn)企業(yè)合作，在其測(cè)序儀原型的基礎(chǔ)上加以改造，形成具有特殊用途的自主品牌的測(cè)序儀，代表公司是貝瑞和康、達(dá)安基因和博奧生物等。

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大部分分子診斷實(shí)驗(yàn)室的核心技術(shù)都主要集中在檢測(cè)特異性、相對(duì)較短的DNA或RNA片段上。該技術(shù)能診斷傳染性疾病、鑒別影響藥物代謝的特殊基因變異型或檢測(cè)與疾病有關(guān)的基因，如與癌癥有關(guān)的基因。這些檢測(cè)的核心是實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)擴(kuò)增（TMA）、靶向擴(kuò)增和信號(hào)擴(kuò)增等類似技術(shù)的應(yīng)用。桑格排序和DNA片段分析或采用毛細(xì)電泳法的凝膠法都是分子診斷實(shí)驗(yàn)室的關(guān)鍵技術(shù)，但他們通常還包括檢測(cè)過程中的擴(kuò)增步驟。為了能順利應(yīng)用那些采用DNA和RNA來診斷疾病的檢測(cè)，分子診斷實(shí)驗(yàn)室須要使用定義明確的工作流程，從而得到穩(wěn)定的、有效的結(jié)果，而當(dāng)前已存在能幫助診斷實(shí)驗(yàn)室實(shí)現(xiàn)每個(gè)工作流程流水化的特殊工具。