保定市實時熒光定量PCR儀服務
發(fā)布時間：2024-05-04 01:14:23
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分子診斷是當代醫(yī)學發(fā)展的重要前沿領域之一，其核心技術是基因診斷，常規(guī)技術包括：（1）聚合酶鏈式反應（PCR）；（2）DNA測序（DNA sequencing）；（3）熒光原位雜交技術（FISH）；（4）DNA印跡技術（ DNA blotting ）；（5）單核苷酸多態(tài)性（SNP）；（6）連接酶鏈反應（LCR）；（7）基因芯片技術（gene chip）。
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Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性，在適反應溫度時，dNTP的摻入速度為35～100 nt/（s．酶分子），擴增長度可達7.6 kb。在低溫條件下，Taq DNA聚合酶的活性明顯降低，導致此酶在模板內局部二級結構區(qū)域的延伸能力受阻或前進速率常數(shù)與解離常數(shù)的比值發(fā)生改變。在較高的溫度（95℃以上）時，很少有DNA合成；在體外，DNA在較高溫度時的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結構穩(wěn)定性的限制。由于Taq DNA聚合酶的適反應溫度高達75～80℃，故退火溫度和延伸溫度均可適當提高，這限制了非特異性擴增產物的出現(xiàn)，增加了PCR反應的特異性。
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分子診斷主要是應用分子生物學方法檢測生物體內遺傳物質的結構或表達水平的變化而做出診斷的技術。由于分子診斷可以從基因層次進行檢測，因此檢測靈敏度和準確性的優(yōu)勢較為明顯，可在感染初期識別病毒或者提早確認基因缺陷，從而提供個性化的醫(yī)療診斷服務，主要應用于遺傳病、傳染性疾病、腫瘤等疾病的檢測與診斷。分子診斷主要包括 核酸診斷 和 生物芯片技術 。
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PCR產品占據(jù)分子診斷的主要市場，基因芯片是分子診斷市場發(fā)展的主要趨勢。PCR產品靈敏度高、特異性強、診斷窗口期短，可進行定性、定量檢測，可廣泛用于肝炎、性病、肺感染性疾病、優(yōu)生優(yōu)育、遺傳病基因、腫瘤等，填補了早期免疫檢測窗口期的檢測空白，為早期診斷、早期治療、安 全用血提供了有效的幫助?；蛐酒欠肿由飳W、微電子、計算機等多學科結合的結晶，綜合了多種現(xiàn)代高精尖技術，被專家譽為診斷行業(yè)產品。但其成本高、開發(fā)難度大，產品種類很少，只用于科研和藥物篩選等用途。
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傳染病流行過程的三:個基本環(huán)節(jié):①傳染源。即傳染來源，就是被感染的動物，包括傳染病病畜禽和帶菌(毒)動物，如潛伏期帶菌(毒)、病愈后帶菌(毒)及健康動物帶菌(毒)等。②傳播方式和途徑。有直接接觸傳播及間接接觸傳播。③易感動物。就是對某種傳染病的病原體有易感性的動物。
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Taq酶的酶動力與擴增效率有關。一般熱啟動Taq酶的酶動力越強，PCR擴增的指數(shù)增長期越長，‘S型’曲線更加典型，熒光信號值更高，而且更適合做多重PCR檢測。我們曾比較過多家公司的熱啟動Taq酶，在國外品牌中，英國Bioline公司的熱啟動Taq酶，酶動力較好，可做4重PCR，等量起始模板CT30時的熒光信號值高。在國內品牌中，BIOG熱啟動Taq酶的指數(shù)期較長，可做3重PCR，且擴增曲線的‘S’型不受影響，其它的國產品牌一般只能支持2重反應，在做3重反應時，擴增曲線低矮，熒光信號值較低，無典型擴增曲線，結果很難判定。