南通市熱啟動(dòng)Taq酶應(yīng)用領(lǐng)域
發(fā)布時(shí)間：2024-09-07 01:11:29
南通市熱啟動(dòng)Taq酶應(yīng)用領(lǐng)域
Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性，在適反應(yīng)溫度時(shí)，dNTP的摻入速度為35～100 nt/（s．酶分子），擴(kuò)增長(zhǎng)度可達(dá)7.6 kb。在低溫條件下，Taq DNA聚合酶的活性明顯降低，導(dǎo)致此酶在模板內(nèi)局部二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū)域的延伸能力受阻或前進(jìn)速率常數(shù)與解離常數(shù)的比值發(fā)生改變。在較高的溫度（95℃以上）時(shí)，很少有DNA合成；在體外，DNA在較高溫度時(shí)的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的限制。由于Taq DNA聚合酶的適反應(yīng)溫度高達(dá)75～80℃，故退火溫度和延伸溫度均可適當(dāng)提高，這限制了非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的出現(xiàn)，增加了PCR反應(yīng)的特異性。
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在PCR反應(yīng)早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產(chǎn)生進(jìn)入指數(shù)期、線性期和終的平臺(tái)期，因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點(diǎn) 上來(lái)檢測(cè)PCR產(chǎn)物的量，并且由此來(lái)推斷模板初的含量。為了便于對(duì)所檢測(cè)樣本進(jìn)行比較，在real-time Q-PCR反應(yīng)的指數(shù)期，首先需設(shè)定一定熒光信號(hào)的域值，一般這個(gè)域值（threshold）是以PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào) （baseline），熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。如果檢測(cè)到熒光信號(hào)超過(guò)域值被認(rèn)為是真 正的信號(hào)，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數(shù)（Ct）。Ct值的含義是：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。
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分子診斷主要是應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測(cè)生物體內(nèi)遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平的變化而做出診斷的技術(shù)。由于分子診斷可以從基因?qū)哟芜M(jìn)行檢測(cè)，因此檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性的優(yōu)勢(shì)較為明顯，可在感染初期識(shí)別病毒或者提早確認(rèn)基因缺陷，從而提供個(gè)性化的醫(yī)療診斷服務(wù)，主要應(yīng)用于遺傳病、傳染性疾病、腫瘤等疾病的檢測(cè)與診斷。分子診斷主要包括 核酸診斷 和 生物芯片技術(shù) 。
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加強(qiáng)技術(shù)指導(dǎo)。中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中 心要制定國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫技術(shù)指南，組織開(kāi)展省級(jí)免疫技術(shù)師資培訓(xùn)。國(guó)家獸醫(yī)參考實(shí)驗(yàn)室、專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室、區(qū)域?qū)嶒?yàn)室和各省份動(dòng)物疫病預(yù)防控制中 心要持續(xù)跟蹤病原變化和流行趨勢(shì)，為各地免疫方案的制定、疫苗的選擇和更新提供技術(shù)支撐。各省份要組織做好鄉(xiāng)鎮(zhèn)動(dòng)物防疫機(jī)構(gòu)、村級(jí)防疫員及社會(huì)化服務(wù)組織的免疫技術(shù)培訓(xùn)。疫苗及診斷試劑供應(yīng)企業(yè)要做好培訓(xùn)、技術(shù)服務(wù)等工作。