朝陽市實時熒光定量PCR儀應用
發(fā)布時間：2024-09-15 01:10:22
朝陽市實時熒光定量PCR儀應用
Taq酶的酶動力與擴增效率有關。一般熱啟動Taq酶的酶動力越強，PCR擴增的指數(shù)增長期越長，‘S型’曲線更加典型，熒光信號值更高，而且更適合做多重PCR檢測。我們曾比較過多家公司的熱啟動Taq酶，在國外品牌中，英國Bioline公司的熱啟動Taq酶，酶動力較好，可做4重PCR，等量起始模板CT30時的熒光信號值高。在國內(nèi)品牌中，BIOG熱啟動Taq酶的指數(shù)期較長，可做3重PCR，且擴增曲線的‘S’型不受影響，其它的國產(chǎn)品牌一般只能支持2重反應，在做3重反應時，擴增曲線低矮，熒光信號值較低，無典型擴增曲線，結果很難判定。
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高致病性禽流感：對全國所有雞、鴨、鵝、鵪鶉等人工飼養(yǎng)的禽類，根據(jù)當?shù)貙嶋H情況，在科學評估的基礎上選擇適宜疫苗，進行H5亞型和（或）H7亞型高致病性禽流感免疫。對供研究和疫苗生產(chǎn)用的家禽、進口國（地區(qū)）明確要求不得實施高致病性禽流感免疫的出口家禽，以及因其他特殊原因不免疫的，有關養(yǎng)殖場（戶）逐級報省級農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門同意后，可不實施免疫。
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隨著對動物檢疫工作的發(fā)展與完善,僅依靠獸醫(yī)的經(jīng)驗檢查已經(jīng)不能滿足現(xiàn)今動物疫病診斷的需求,因此,病理化驗室開始發(fā)揮重要作用.如藍耳病的病原學檢測方式需要采集病豬的扁桃體,淋巴結,肺,肝,脾等,利用10%的中性福爾馬林進行固定,經(jīng)過石蠟切片,HE染色之后使用光鏡對樣本進行病理學組織檢查得出結論,又如豬瘟的病理學檢查方式主要有免疫熒光實驗,酶聯(lián)免疫吸附實驗,核酸探針技術,基因芯片檢測技術等.
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加強技術指導。中國動物疫病預防控制中 心要制定國家動物疫病強制免疫技術指南，組織開展省級免疫技術師資培訓。國家獸醫(yī)參考實驗室、專業(yè)實驗室、區(qū)域實驗室和各省份動物疫病預防控制中 心要持續(xù)跟蹤病原變化和流行趨勢，為各地免疫方案的制定、疫苗的選擇和更新提供技術支撐。各省份要組織做好鄉(xiāng)鎮(zhèn)動物防疫機構、村級防疫員及社會化服務組織的免疫技術培訓。疫苗及診斷試劑供應企業(yè)要做好培訓、技術服務等工作。
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指導思想。按照保供固安 全、振興暢循環(huán)的工作定位，立足維護養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展安 全、公共衛(wèi)生安 全和生物安 全大局，堅持防疫優(yōu)先，扎實開展動物疫病強制免疫，切實筑牢動物防疫屏障。基本原則。堅持人病獸防、關口前移，預防為主、應免盡免，落實完善免疫效果評價制度，強化疫苗質量管理和使用效果跟蹤監(jiān)測，保證“真苗、真打、真有效".目標要求。強制免疫動物疫病的群體免疫密度應常年保持在百分之90以上，應免畜禽免疫密度應達到百分之100，高致病性禽流感、口蹄疫和小反芻獸疫免疫抗體合格率常年保持在百分之70以上。
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熱啟動PCR（hot start PCR）是指使Taq DNA 聚合酶只有在樣品溫度至少超過70℃時才發(fā)揮作用的PCR，可提高反應的特異性。Taq DNA 聚合酶通常在比適宜溫度低得多的條件下仍有較強的活性。PCR 反應的初加熱過程中，樣品溫度上升到70℃之前，在較低的溫度下引物可能與部分單鏈模板形成非特異性結合，并在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。結果會導致非靶序列的擴增，影響反應的特異性。熱啟動可減少非靶序列的擴增，提高反應的特異性。在引物設計時如果某位點因為遺傳元件的定位而受限，如site-directed 突變、表達克隆或用于DNA 工程的遺傳元件的構建和操作等情況，熱啟動PCR 尤為有效。