滄州市實(shí)時熒光定量PCR儀廠家
發(fā)布時間：2025-01-01 01:01:24
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Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性，在適反應(yīng)溫度時，dNTP的摻入速度為35～100 nt/（s．酶分子），擴(kuò)增長度可達(dá)7.6 kb。在低溫條件下，Taq DNA聚合酶的活性明顯降低，導(dǎo)致此酶在模板內(nèi)局部二級結(jié)構(gòu)區(qū)域的延伸能力受阻或前進(jìn)速率常數(shù)與解離常數(shù)的比值發(fā)生改變。在較高的溫度（95℃以上）時，很少有DNA合成；在體外，DNA在較高溫度時的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的限制。由于Taq DNA聚合酶的適反應(yīng)溫度高達(dá)75～80℃，故退火溫度和延伸溫度均可適當(dāng)提高，這限制了非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的出現(xiàn)，增加了PCR反應(yīng)的特異性。
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動物疫病包括動物傳染病、寄生蟲病。動物傳染病，即由病原體侵入動物體內(nèi)，使動物產(chǎn)生具有一定潛伏期和臨床癥狀并具有傳播性 的動物疫病，如口蹄疫、雞瘟、牛肺疫、炭疽、布魯氏菌病、狂 犬病等。動物寄生蟲病，即由寄生蟲寄生在動物體內(nèi)或體表引起 的疾病，如豬囊蟲病、旋毛蟲病、鉤端螺旋體病、血吸蟲病、疥瞞等。根據(jù)動物疫病對養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)和人體健康的危害程度，我國還 將動物疫病分為下列三類：對人畜危害嚴(yán)重、需要采取緊急、嚴(yán) 厲的強(qiáng)制預(yù)防、控制、撲滅措施的為一類疫??；可造成重大經(jīng)濟(jì) 損失、需要采取嚴(yán)格控制、撲滅措施，防止疫情擴(kuò)散的為二類疫 ??；常見多發(fā)、可能造成重大經(jīng)濟(jì)損失、需要控制和凈化的為三 類疫病。
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化驗(yàn)室診斷方法- -般采用的檢測依據(jù)為國家標(biāo)準(zhǔn)、農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，其次是有關(guān)動物疫病檢測的其它技術(shù)規(guī)程、規(guī)范等，還可以采用化驗(yàn)室自行設(shè)定的檢測方法。應(yīng)結(jié)合化驗(yàn)室條件及樣品類型等因素來選擇合適的方法。例如，化驗(yàn)室需診斷偽狂犬病，如果沒有基因擴(kuò)增儀，但有酶標(biāo)儀，就可以采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷，而不必用聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)診斷。使用化驗(yàn)室自行設(shè)定的檢驗(yàn)方法要慎重,因?yàn)?，一該檢驗(yàn)方法是否正確有待驗(yàn)證;二如果將來有爭議.上訴法院，會有較大的麻煩。
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化驗(yàn)室診斷方法采用的檢測依據(jù)有以下幾種:①國家標(biāo)準(zhǔn)以及農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn);②動物疫病檢測的其他規(guī)范:③化驗(yàn)室自行設(shè)定的檢測方法。不管采用何種方法，都需要考慮化驗(yàn)室自身的條件及樣品類型，如在對偽狂犬病進(jìn)行診斷時，實(shí)驗(yàn)室有酶標(biāo)儀，沒有基因擴(kuò)增儀，在診斷時檢測人員可采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行診斷。如果送檢樣品為血清，檢測人員則可以采用酶聯(lián)吸附試驗(yàn)，而不需要采用動物接種試驗(yàn)與病毒分離鑒定方法。
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分子診斷的主要技術(shù)有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)和生物芯片技術(shù)。1.核酸分子雜交技術(shù) 具有一定互補(bǔ)序列和核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補(bǔ)配對原則締合成異質(zhì)雙鏈的過程，稱為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測核酸序列和探針序列。應(yīng)用該技術(shù)可對特定DNA或RNA序列進(jìn)行定性或定量檢測。2.聚合酶鏈反應(yīng)（即Polymerase chain reaction，PCR）原理：PCR是模板DNA，引物和四種脫氧核糖核昔三磷酸（dNTP）在DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促聚合反應(yīng)，擴(kuò)增出所需目的DNA。包括三個基本步驟：雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈（變性）；在低溫下引物與單鏈DNA互補(bǔ)配對（退火）；在適宜溫度下TapDNA聚合酶催化引物沿著模板DNA延伸。3.生物芯片技術(shù)是近年發(fā)展起來的分子生物學(xué)與微電子技術(shù)相結(jié)合的核酸分析檢測技術(shù)。起初的生物芯片技術(shù)主要目標(biāo)是用于DNA序列測定、基因表達(dá)譜鑒定和基因突變體檢測和分析，所以又稱為DNA芯片或基因芯片技術(shù)。由于這一技術(shù)已擴(kuò)展至免疫反應(yīng)、受體結(jié)合等非核酸領(lǐng)域，出現(xiàn)了蛋白質(zhì)芯片、免疫芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片等，所以改稱生物芯片技術(shù)更符合發(fā)展趨勢。