蕪湖市實時熒光定量PCR儀標準
發(fā)布時間：2022-09-21 01:37:00
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加強組織領導。地方各級人民政府對轄區(qū)內動物防疫工作負總責，組織有關部門按照職責分工，落實強制免疫工作任務。省級農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門具體組織實施強制免疫，各級動物疫病預防控制機構負責開展養(yǎng)殖環(huán)節(jié)強制免疫效果評價，各級承擔動物衛(wèi)生監(jiān)督職責的機構負責監(jiān)督檢查養(yǎng)殖場（戶）履行強制免疫義務情況。落實主體責任?！吨腥A人民共和國動物防疫法》規(guī)定，飼養(yǎng)動物的單位和個人是免疫主體，承擔免疫責任。有關單位和個人應自行開展免疫或向第三方服務主體購買免疫服務，對飼養(yǎng)動物實施免疫接種，并按有關規(guī)定建立免疫檔案、加施畜禽標識，確保可追溯。
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Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性，在適反應溫度時，dNTP的摻入速度為35～100 nt/（s．酶分子），擴增長度可達7.6 kb。在低溫條件下，Taq DNA聚合酶的活性明顯降低，導致此酶在模板內局部二級結構區(qū)域的延伸能力受阻或前進速率常數(shù)與解離常數(shù)的比值發(fā)生改變。在較高的溫度（95℃以上）時，很少有DNA合成；在體外，DNA在較高溫度時的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結構穩(wěn)定性的限制。由于Taq DNA聚合酶的適反應溫度高達75～80℃，故退火溫度和延伸溫度均可適當提高，這限制了非特異性擴增產(chǎn)物的出現(xiàn)，增加了PCR反應的特異性。
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做好免疫記錄。養(yǎng)殖場（戶）要詳細記錄畜禽存欄、出欄、免疫等情況，特別是疫苗種類、生產(chǎn)廠家、生產(chǎn)批號等信息。鄉(xiāng)鎮(zhèn)動物防疫機構、村級防疫員要做好免疫記錄、按時報告，確保免疫記錄與畜禽標識相符。落實報告制度。各省份按月報告疫苗采購及免疫情況。在每年3—5月、9—11月春秋兩季集中免疫期間，對免疫進展實行周報告制度。各省份要明確專人負責匯總、統(tǒng)計免疫信息，按時報中國動物疫病預防控制中 心。
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熱啟動PCR（hot start PCR）是指使Taq DNA 聚合酶只有在樣品溫度至少超過70℃時才發(fā)揮作用的PCR，可提高反應的特異性。Taq DNA 聚合酶通常在比適宜溫度低得多的條件下仍有較強的活性。PCR 反應的初加熱過程中，樣品溫度上升到70℃之前，在較低的溫度下引物可能與部分單鏈模板形成非特異性結合，并在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。結果會導致非靶序列的擴增，影響反應的特異性。熱啟動可減少非靶序列的擴增，提高反應的特異性。在引物設計時如果某位點因為遺傳元件的定位而受限，如site-directed 突變、表達克隆或用于DNA 工程的遺傳元件的構建和操作等情況，熱啟動PCR 尤為有效。
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熱啟動 Taq 酶的應用：PCR 能夠快速特異的擴增任何已知的 DNA 片段，因此被廣泛的應用于分子生物學的各個領域。Relia 熱啟動酶因具有 5’-3’核酸外切酶活性，可用于熒光定量 PCR 反應。采用熱啟動法擴增是提高 PCR 特異性的常用方法，熱啟動酶是很好的選擇。除此之外，因其具有的高特異性高靈敏度被廣泛應用到各個方面：構建 cDNA 文庫，產(chǎn)生大量 DNA 測序，突變體分的析構建，基因分離，遺傳病診斷，法醫(yī)鑒定等。
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分子診斷是當代醫(yī)學發(fā)展的重要前沿領域之一，其核心技術是基因診斷，常規(guī)技術包括：（1）聚合酶鏈式反應（PCR）；（2）DNA測序（DNA sequencing）；（3）熒光原位雜交技術（FISH）；（4）DNA印跡技術（ DNA blotting ）；（5）單核苷酸多態(tài)性（SNP）；（6）連接酶鏈反應（LCR）；（7）基因芯片技術（gene chip）。