銅陵市熱啟動Taq酶標準
發(fā)布時間:2023-02-16 01:34:22
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在動物疫病診斷標準等技術(shù)規(guī)范中,酶聯(lián)免疫吸附試驗對試驗中加底物的反應(yīng)步驟進行規(guī)定,規(guī)定固定的時間,然后加終止液。但是,在許多酶聯(lián)免疫吸附試驗中,加底物的反應(yīng)步驟需要根據(jù)陰性、陽性對照反應(yīng)情況對反應(yīng)的時間進行調(diào)整。如當陰性與陽性對照的反應(yīng)結(jié)果出現(xiàn)后,實驗人員則可以加終止液。有關(guān)資料規(guī)定的時間可能太長或者太短,這樣會對反應(yīng)的結(jié)果產(chǎn)生影響。如果加底物的反應(yīng)時間較長,樣品則有可能呈現(xiàn)陽性,易導(dǎo)致誤診情況的產(chǎn)生。

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熱啟動 Taq 酶的應(yīng)用:PCR 能夠快速特異的擴增任何已知的 DNA 片段,因此被廣泛的應(yīng)用于分子生物學(xué)的各個領(lǐng)域。Relia 熱啟動酶因具有 5’-3’核酸外切酶活性,可用于熒光定量 PCR 反應(yīng)。采用熱啟動法擴增是提高 PCR 特異性的常用方法,熱啟動酶是很好的選擇。除此之外,因其具有的高特異性高靈敏度被廣泛應(yīng)用到各個方面:構(gòu)建 cDNA 文庫,產(chǎn)生大量 DNA 測序,突變體分的析構(gòu)建,基因分離,遺傳病診斷,法醫(yī)鑒定等。

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動物疫病診斷的主要內(nèi)容有:一是對血、 尿、糞等進行臨床常規(guī)化驗;二是從流行病學(xué)角度,調(diào)查研究動物疫病流行情況,主要調(diào)查動物發(fā)病時間及地點、疫病蔓延情況、疫情來源及傳播的途徑與方式等;三是從病理學(xué)方面,剖檢因忠傳染病而死亡的畜禽尸體,查看其病理變化,或者取病料進行送檢,再進一步做病理組織學(xué)方面的診斷;四是從微生物學(xué)角度,檢查、堅定從患病的畜禽病料當中分離并且培養(yǎng)出來的病原微生物,或者是進行動物接種試驗等,五是從免疫學(xué)角度,對組織或者細胞的變態(tài)反應(yīng)、細胞的免疫功能及血清學(xué)反應(yīng)等進行診斷。

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分子診斷的主要技術(shù)有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)和生物芯片技術(shù)。1.核酸分子雜交技術(shù) 具有一定互補序列和核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補配對原則締合成異質(zhì)雙鏈的過程,稱為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測核酸序列和探針序列。應(yīng)用該技術(shù)可對特定DNA或RNA序列進行定性或定量檢測。2.聚合酶鏈反應(yīng)(即Polymerase chain reaction,PCR)原理:PCR是模板DNA,引物和四種脫氧核糖核昔三磷酸(dNTP)在DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促聚合反應(yīng),擴增出所需目的DNA。包括三個基本步驟:雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈(變性);在低溫下引物與單鏈DNA互補配對(退火);在適宜溫度下TapDNA聚合酶催化引物沿著模板DNA延伸。3.生物芯片技術(shù)是近年發(fā)展起來的分子生物學(xué)與微電子技術(shù)相結(jié)合的核酸分析檢測技術(shù)。起初的生物芯片技術(shù)主要目標是用于DNA序列測定、基因表達譜鑒定和基因突變體檢測和分析,所以又稱為DNA芯片或基因芯片技術(shù)。由于這一技術(shù)已擴展至免疫反應(yīng)、受體結(jié)合等非核酸領(lǐng)域,出現(xiàn)了蛋白質(zhì)芯片、免疫芯片、細胞芯片、組織芯片等,所以改稱生物芯片技術(shù)更符合發(fā)展趨勢。

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做好免疫記錄。養(yǎng)殖場(戶)要詳細記錄畜禽存欄、出欄、免疫等情況,特別是疫苗種類、生產(chǎn)廠家、生產(chǎn)批號等信息。鄉(xiāng)鎮(zhèn)動物防疫機構(gòu)、村級防疫員要做好免疫記錄、按時報告,確保免疫記錄與畜禽標識相符。落實報告制度。各省份按月報告疫苗采購及免疫情況。在每年3—5月、9—11月春秋兩季集中免疫期間,對免疫進展實行周報告制度。各省份要明確專人負責(zé)匯總、統(tǒng)計免疫信息,按時報中國動物疫病預(yù)防控制中 心。